胆固醇氧化酶/9028-76-6

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中文:胆固醇氧化酶
英文:cholesteroloxidase
CAS:9028-76-6
分子式:C47H53NO15
纯度:≥90%
货期:24h
货号:HH0501-01
规格:2ku
中文同义词:胆固醇氧化酶
英文同义词:CholesterolOxidasefromPseudomonassp.;cholesteroloxidaseF.pseudomonassp.;CholesterolOxidaseNocardiaerythropolis;CholesterolOxidase,Streptomycessp.
技术指标

外观:黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥8U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.001%;胆固醇酯酶:≤0.01%;葡萄糖氧化酶:≤0.01%;ATP酶:≤0.005%

酶学性质

来源:微生物;分类:EC1.1.3.6;分子量:60kDa(SDS-PAGE);等电点:5.6;Km值:3.3×10-4M(Cholesterol);抑制剂:SDS,Ag+,Zn2+,Hg2+;最适pH:7.0;最适温度:50℃;pH稳定性:5.5-10(25℃,16h);热稳定性:40℃以下稳定(pH7.0,30min);稳定性:-25~-15℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:BSA以及非离子型表面活性剂.

用于外贸出口、科学研究和化学试剂等领域

酶活定义

单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化生成1μmolH2O2所需的酶量。

试剂准备

试剂I:0.1M磷酸钾缓冲液,pH6.5。

试剂II:在500ml烧杯中加入5mLTriton

X-100和0.5g胆固醇,用保鲜膜密封,用微波炉加热至胆固醇完全溶解。缓慢加入90mL双蒸水,加热并使其沸腾30-60s,溶液将变浑浊。用自来水淋洗使溶液冷却,冷却后的溶液会变澄清,若冷却后未变澄清则需要重新加热使其完全溶解。在澄清的溶液中加入0.4g胆酸钠,用双蒸水定容至100mL。定容后用0.22um滤膜过滤,此溶液在室温下一周内稳定。如果该溶液变浑浊,可轻微加热使其澄清。试剂III:纯水配制100U/mLPOD。

试剂IV:50mM4-AA溶液(1.016g4-AA溶于100mLUP水)。

试剂V:50mMTOOS溶液(1.477gTOOS溶于100mLUP水)。

酶稀释液:20mM磷酸钾缓冲液,pH7.0,含0.2%BSA。

样品:用酶稀释液将酶稀释至0.05-0.2U/mL。

按如下配制反应混合物:

试剂I:53mL;试剂II:7mL;试剂III:5mL;试剂IV:3mL;试剂V:3mL;双蒸水:19mL;共90mL,可用于100次反应

操作步骤

1.将反应混合物置于37℃水浴锅预热;

2.向1mL比色皿中加入0.9mL反应混合物。

3.向反应混合物中加入0.1mL待测酶液,混匀。

4.37℃反应,用分光光度计在555nm检测样品1min内的吸光度变化(ΔAs)

*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb